Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型白血病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出去甲性疾病反应到显现出1型号肾病针灸疼痛的十分困难率在儿童时期就有较好的描绘出，多个去甲性疾病反应非典型号的儿童里面有70%在毒素转换后10年内患上肾病，而随访15年的儿童这一数量增高到84%。比起，占针灸1型号肾病一半以上的型号1型号肾病的病症机制还很难给予充分的数据分析。

愈发多的人开始用到有系统系统来定义1型号肾病的十分困难：有机体在显现出多种去甲性疾病反应时转回第1过渡阶段，显现出皮质醇异常时转回第2过渡阶段，显现出疼痛时转回第3过渡阶段。一些多发去甲性疾病反应非典型号的有机体，在1期和2期，十分困难较慢，并拓展为病症的1型号肾病。我们之前描绘出了一两组在首次侦测到多种去甲性疾病反应样本后最少10年无肾病的短时间十分困难者，这两组病患者人数少，但外观上非常指明。随后，我们断定去甲自身上皮细胞基因表达CD8+T两条路线粒体反应在十分困难很慢的病患者里面前提不假定，但在更进一步病症和长期假定的肾病病患者里面很容易侦测到。这可能会指出，与十分困难病患者相对来说，这些病患者性疾病反应的调节增强。

早期数据分析指出，尽管调节性T两条路线粒体(Treg)数量正常，但肾病病患者假定一些系统不足之处，其里面包括对IL-2的反应控制能力增加。此外，肾病病患者里面的现象CD4+T两条路线粒体可能会对调节更为重要抵抗性，表现为现象T两条路线粒体的消除移向，自然产生的Treg和粘液产生的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T两条路线粒体里面IL-2反应移向。本数据分析的目地是描绘出了CD4+调节性T两条路线粒体(Treg)在一小群极很慢十分困难者里面的外观上，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法有：BOX数据分析是一项以群体基础上的纵向数据分析，在21岁表列出患病的病患者亲属里面检查1型号肾病的致命主因。我们之前描绘出了长期很慢十分困难者的外观上，他们保有多重去甲性疾病反应非典型号超过10年，但很难显现出肾病的针灸疼痛，慢性或非短暂性性疾病。随后，10名之前保有无肾病并想包括大量血液样本的很慢十分困难者纳入T和B两条路线粒体系统数据分析。在目前的数据分析里面，8名慢十分困难者(SP两组)，里面位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的去甲性疾病反应非典型号。所有的与会者都处于1型号肾病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了去甲性疾病反应对某些上皮细胞的非典型号反应，然而，一名病患者已经处于2期最少6年，但很难显现出针灸疼痛，一名病患者被诊断为肾病，该病患72岁，在采集实验样本时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里面对该丝氨酸完成了实质上检验。分离外周血单个核两条路线粒体(PBMCs)，采用多参数流式两条路线粒体妖术和T两条路线粒体消除试验检验丝氨酸里面Treg的振幅、遗传和系统。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、也就是说和回归)完成无统筹聚类数据分析，检验Treg遗传。

结果：与心理健康丝氨酸相对来说，来自慢十分困难体的心灵CD4+T两条路线粒体的统筹聚类推断，启动时的心灵CD4+ Treg振幅增高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达增高有关。一名HbA1c增高的病患者与十分困难很慢者和匹配的大鼠相对来说，Treg谱略有完全相同。系统数据分析指出，与心理健康丝氨酸相对来说，来自很慢十分困难体的Treg介导的CD4+现象T两条路线粒体消除值得注意受损。表现为对现象CD4+T两条路线粒体CD25和CD134传达的消除增高。

绘出1 深入的遗传数据分析推断，CD4+Treg共通点号在慢十分困难描绘出符里面增高。由FlowSOM生成的Treg二楼，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -两条路线粒体上。根据记号物传达鉴定出10个元簇:心灵T两条路线粒体_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T两条路线粒体;HLA-DR + GITR +心灵T两条路线粒体;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用到9个完全相同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个键值代表一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在键值两组外围上色。每个键值里面的煎饼绘出坚称单个记号的传达级别。(b)每个元聚类的热绘出，以推断基本记号传达。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的裂口。(e-l)较为重元素为每个metacluster木箱两条路线绘出(重元素> 0.05%)断定为HD和SP两组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T两条路线粒体(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T两条路线粒体(l)。绿色左上方代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 用到CITRUS的估测声称，Treg振幅的增高是十分困难很慢的图案。分级暂时性(a - f)和葡萄数据分析(g-k)较为SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T两条路线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR传达完成分离，虚拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)两组以及丝氨酸SP 606(绿色)里面CD25+ cd127的振幅汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性姪集的木箱两条路线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)棉花簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达其中心着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD描绘出符相互间的完全相同。(j)木箱两条路线绘出推断了在SP(黑纹)和HD(灰点)两组里面，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的较为重元素(数量)。(k)直方绘出推断每个簇的遗传(红色)和Treg记号较为传达与剧中传达(红色);上列，存储器Treg_3;前面一行，存储器Treg_4。剧中与所有其他簇里面记号的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出3 与心理健康献血者相对来说，十分困难很慢者心灵treg的GITR增高。每个心灵CD4+T两条路线粒体元簇(心灵T两条路线粒体_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T两条路线粒体;HLA-DR + GITR +心灵T两条路线粒体;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个传达记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描绘出符的传达热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR传达相联，推断直方绘出(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(红色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR传达，从分级暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(绿色)相联，推断直方绘出(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出4 来自很慢十分困难的CD4+ treg两条路线粒体控制现象CD4+T两条路线粒体的控制能力增加。SP两组用红色的两条路线和左上方坚称，HD两组用金色的两条路线和左上方坚称，绿色的两条路线/左上方坚称丝氨酸sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T两条路线粒体完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被记号为CFSE, Treg按通过观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠转化两条路线粒体，培养3天后完成流式两条路线粒体妖术侦测。(a-d)与CD4+这样的话者较为应的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE消除%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除%-。用到非典型号对照(启动时的响应两条路线粒体不含treg)计算消除%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

绘出5 现象CD4+T两条路线粒体对很慢十分困难的T两条路线粒体转化的消除更敏感。SP两组用红色的两条路线和左上方坚称，HD两组用金色的两条路线和左上方坚称，绿色的两条路线/左上方坚称丝氨酸sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T两条路线粒体完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel记号，treg按通过观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠转化两条路线粒体，培养3天后完成流式两条路线粒体妖术(CD25反染)和两条路线粒体因姪数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE消除百分率(b)。(c,d) CD25消除百分率(c)和CD134消除百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养里面的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

论证：我们算出的论证是，来自很慢十分困难姪的转化心灵CD4+Treg在GITR传达里面给予了延展和丰富，凸显了进一步数据分析Treg在1型号肾病风险有机体里面的异质性的必要性。

原文应是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28